熒光顯微鏡濾光片的性能,什麽是高性能濾光片?
發布時間:2021-02-18
熒光顯微鏡濾光片的性能,什麽是高性能濾光片?

       對於高性能濾光片,應該是頻幅選擇性範圍窄、光譜特異性強才能達到熒光光度分析的高水平的需求,這種性能若是用光學物理量表示的話,就是半波峰寬度和透光度的數據。以Leitz 公司的兩張綠色濾光片為例來比較這些物理量的具體參數,1所示的綠色玻璃濾光片的波長範圍為400600 nm,透光度為60%,半波峰寬度為80 nm。從透射曲線的波峰的中腰部(1/2高度)X(波長)引兩條垂直線,兩線間的寬度就是半波峰寬度,它能準確地反映出濾光片的選擇性波長的質量。

        圖2所示為綠色幹涉濾光片的透添射曲線,這種濾光片的波長選擇範圍為480~520 nm,透光度為60%,半波峰高度(HBW)為20 nm.從兩張透射曲線圖可以看出,同樣是綠色濾光片,透光度都是60%的條件下,後者的半波峰寬度僅為20nm,其相對能量幾乎集中在500nm處的很窄範圍內,證明綠色幹涉濾光片是窄頻譜、短波長、光譜特異性很強的高性能濾光片。

          用熒光顯微技術在觀察受激而發光不強的樣本時,往往需要給予最強光源才能得到所需的熒光效應。為此需要最強激發高性能寬頻譜幹涉渺濾光片,這些濾光片所透射的波長範圍內熒光效應最清楚。熒光素能否激發出最強、最鮮豔的熒光,最關鍵的因素就是正確選配與每一種熒光素相匹配的濾光片組。

        要掌握每種熒光素所發射的熒光光譜波峰,才能正確應用濾光片的特征性激發光譜波峰、阻擋光譜波峰和分色光譜波峰。例如異硫氰酸熒光素的激發光光譜波峰在490nm,而發射熒光的波峰在525 nm,二者之間隻有35 nm之差(見圖4)

為了得到異硫氰酸熒光素最強最鮮豔的熒光效應,就應當選擇一個透射光譜的波段為450490 nm 的藍色激發片或激發濾光片組,對應這種激發片應選擇一個LP515長波阻擋濾光片,再附加一個截止點為510 nm的色光分離反射濾光片,即能保障激發光和發射熒光的波峰分離,這就是說為了得到異硫氰酸熒光素的最佳熒光影像,就要選配LP450KP490RKP510LP515(見圖4)


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